Πώς να προσδιορίσετε τη βέλτιστη συγκέντρωση;
Για τον επαγωγέα IPTG (ισοπροπυλ-βήτα-d-θειογαλακτοσίδη), όσο υψηλότερη είναι η συγκέντρωση, τόσο το καλύτερο.Η βέλτιστη συγκέντρωση εξαρτάται από τις συγκεκριμένες πειραματικές συνθήκες και το επιθυμητό αποτέλεσμα επαγωγής.
Γενικά, η συγκέντρωση του IPTG χρησιμοποιείται στην περιοχή 0,1-1 mM.Οι χαμηλότερες συγκεντρώσεις μπορούν να μειώσουν τις δυσμενείς επιπτώσεις στην ανάπτυξη των κυττάρων και μπορούν να μειώσουν την κυτταροτοξικότητα λόγω της υπερέκφρασης των πρωτεϊνών-στόχων.Υψηλότερες συγκεντρώσεις μπορεί να προκαλέσουν υπερβολική μεταβολική επιβάρυνση των κυττάρων, επηρεάζοντας την κυτταρική ανάπτυξη και την αποτελεσματικότητα έκφρασης.
Ο τρόπος προσδιορισμού της βέλτιστης συγκέντρωσης μπορεί να είναι η αξιολόγηση του επιπέδου έκφρασης της πρωτεΐνης στόχου με τη διεξαγωγή δοκιμών επαγωγής IPTG σε διαφορετικές συγκεντρώσεις.Δοκιμές καλλιέργειας μικρής κλίμακας μπορούν να πραγματοποιηθούν χρησιμοποιώντας μια σειρά συγκεντρώσεων IPTG (π.χ. 0,1 mM, 0,5 mM, 1 mM, κ.λπ.) και το αποτέλεσμα έκφρασης σε διαφορετικές συγκεντρώσεις μπορεί να αξιολογηθεί ανιχνεύοντας το επίπεδο έκφρασης της πρωτεΐνης στόχου (π.χ. Western ανίχνευση κηλίδας ή φθορισμού).Σύμφωνα με τα πειραματικά αποτελέσματα, η συγκέντρωση με το καλύτερο αποτέλεσμα έκφρασης επιλέχθηκε ως η βέλτιστη συγκέντρωση.
Επιπλέον, μπορείτε επίσης να ανατρέξετε στη σχετική βιβλιογραφία ή στην εμπειρία άλλων εργαστηρίων για να κατανοήσετε το εύρος συγκεντρώσεων IPTG που χρησιμοποιείται συνήθως σε παρόμοιες πειραματικές συνθήκες και στη συνέχεια να βελτιστοποιήσετε και να προσαρμόσετε ανάλογα με τις πειραματικές ανάγκες.
Είναι σημαντικό να σημειωθεί ότι η βέλτιστη συγκέντρωση μπορεί να ποικίλλει ανάλογα με τα διαφορετικά συστήματα έκφρασης, τις πρωτεΐνες-στόχους και τις πειραματικές συνθήκες, επομένως είναι καλύτερο να βελτιστοποιηθεί κατά περίπτωση.
Ώρα δημοσίευσης: Σεπ-28-2023