4-Νιτροφαινυλο βήτα-D-γαλακτοπυρανοσίδιο CAS:200422-18-0

Επίδραση: Το ONPG είναι ένα υπόστρωμα που χρησιμοποιείται ειδικά για την ανίχνευση της παρουσίας και της δραστηριότητας του ενζύμου β-γαλακτοσιδάση.Όταν το ένζυμο β-γαλακτοσιδάση είναι παρόν και ενεργό, διασπά το ONPG σε δύο προϊόντα: την ο-νιτροφαινόλη και ένα παράγωγο γαλακτόζης.Η απελευθέρωση της ο-νιτροφαινόλης έχει ως αποτέλεσμα μια κίτρινη αλλαγή χρώματος, η οποία μπορεί να μετρηθεί χρησιμοποιώντας ένα φασματοφωτόμετρο.

Εφαρμογή: Το ONPG έχει πολλές εφαρμογές στη μοριακή βιολογία και την έρευνα στη βιοχημεία:

Προσδιορισμός της δραστικότητας της β-γαλακτοσιδάσης: Το ONPG χρησιμοποιείται συνήθως για τη μέτρηση και την ποσοτικοποίηση της δραστηριότητας του ενζύμου β-γαλακτοσιδάσης.Ο ρυθμός σχηματισμού ο-νιτροφαινόλης, ο οποίος είναι ευθέως ανάλογος με τη δραστηριότητα του ενζύμου, μπορεί να μετρηθεί φασματοφωτομετρικά.

Γονιδιακή έκφραση και ρύθμιση: Το ONPG χρησιμοποιείται συχνά σε πειράματα που σχετίζονται με μελέτες γονιδιακής έκφρασης και ρύθμισης.Χρησιμοποιείται συχνά σε προσδιορισμούς πρωτεϊνών σύντηξης, όπως το ευρέως χρησιμοποιούμενο σύστημα σύντηξης lacZ, για τη μελέτη της έκφρασης γονιδίων υπό τον έλεγχο συγκεκριμένων προαγωγέων.Η δραστηριότητα της βήτα-γαλακτοσιδάσης που μετρήθηκε με τη χρήση ONPG παρέχει πληροφορίες για το επίπεδο γονιδιακής έκφρασης.

Έλεγχος για δραστηριότητα β-γαλακτοσιδάσης: Το ONPG μπορεί να χρησιμοποιηθεί ως χρωματομετρική μέθοδος διαλογής στην τεχνολογία ανασυνδυασμένου DNA για τον εντοπισμό της παρουσίας και της λειτουργικότητας του γονιδίου LacZ, το οποίο κωδικοποιεί τη β-γαλακτοσιδάση.Αυτή η μέθοδος διαλογής βοηθά στον εντοπισμό κλώνων που περιέχουν το γονίδιο ενδιαφέροντος.

Μελέτες ενζυμικής κινητικής: Το ONPG είναι επίσης χρήσιμο στη μελέτη της κινητικής του ενζύμου β-γαλακτοσιδάσης.Με τη μέτρηση του ρυθμού αντίδρασης ενζύμου-υποστρώματος σε διαφορετικές συγκεντρώσεις υποστρώματος, είναι δυνατός ο προσδιορισμός κινητικών παραμέτρων όπως οι σταθερές Michaelis-Menten (Km) και οι μέγιστοι ρυθμοί αντίδρασης (Vmax).