4-νιτροφαινυλ βήτα-D-γαλακτοπυρανοσίδη CAS:200422-18-0

Επίδραση: Η ONPG είναι ένα υπόστρωμα που χρησιμοποιείται ειδικά για την ανίχνευση της παρουσίας και της δραστικότητας του ενζύμου β-γαλακτοσιδάση. Όταν το ένζυμο β-γαλακτοσιδάση είναι παρόν και ενεργό, διασπά την ONPG σε δύο προϊόντα: ο-νιτροφαινόλη και ένα παράγωγο γαλακτόζης. Η απελευθέρωση ο-νιτροφαινόλης έχει ως αποτέλεσμα μια κίτρινη αλλαγή χρώματος, η οποία μπορεί να μετρηθεί χρησιμοποιώντας φασματοφωτόμετρο.

Εφαρμογή: Το ONPG έχει διάφορες εφαρμογές στην έρευνα μοριακής βιολογίας και βιοχημείας:

Προσδιορισμός της δραστικότητας της β-γαλακτοσιδάσης: Η ONPG χρησιμοποιείται συνήθως για τη μέτρηση και την ποσοτικοποίηση της δραστικότητας του ενζύμου β-γαλακτοσιδάσης. Ο ρυθμός σχηματισμού ο-νιτροφαινόλης, ο οποίος είναι άμεσα ανάλογος με τη δραστικότητα του ενζύμου, μπορεί να μετρηθεί φασματοφωτομετρικά.

Έκφραση και ρύθμιση γονιδίων: Η ONPG χρησιμοποιείται συχνά σε πειράματα που σχετίζονται με μελέτες γονιδιακής έκφρασης και ρύθμισης. Χρησιμοποιείται συχνά σε δοκιμασίες πρωτεϊνών σύντηξης, όπως το συνήθως χρησιμοποιούμενο σύστημα σύντηξης lacZ, για τη μελέτη της έκφρασης γονιδίων υπό τον έλεγχο συγκεκριμένων υποκινητών. Η δραστικότητα της βήτα-γαλακτοσιδάσης που μετράται χρησιμοποιώντας ONPG παρέχει πληροφορίες για το επίπεδο της γονιδιακής έκφρασης.

Έλεγχος για τη δραστικότητα της β-γαλακτοσιδάσης: Η ONPG μπορεί να χρησιμοποιηθεί ως χρωματομετρική μέθοδος ελέγχου στην τεχνολογία ανασυνδυασμένου DNA για την αναγνώριση της παρουσίας και της λειτουργικότητας του γονιδίου LacZ, το οποίο κωδικοποιεί τη β-γαλακτοσιδάση. Αυτή η μέθοδος ελέγχου βοηθά στην αναγνώριση κλώνων που περιέχουν το γονίδιο που μας ενδιαφέρει.

Μελέτες κινητικής ενζύμων: Η ONPG είναι επίσης χρήσιμη στη μελέτη της κινητικής του ενζύμου β-γαλακτοσιδάσης. Μετρώντας τον ρυθμό αντίδρασης ενζύμου-υποστρώματος σε διαφορετικές συγκεντρώσεις υποστρώματος, είναι δυνατό να προσδιοριστούν κινητικές παράμετροι όπως οι σταθερές Michaelis-Menten (Km) και οι μέγιστοι ρυθμοί αντίδρασης (Vmax).