Υπάρχουν πολλοί αφανείς ήρωες γύρω μας, που φαίνονται συνηθισμένοι, αλλά στην πραγματικότητα μας προσφέρουν σιωπηλά πολλά.Η πρωτεϊνάση Κ είναι ο «αφανής ήρωας» στη βιομηχανία μοριακής διάγνωσης, αν και σε σύγκριση με τη «μεγάλη και ισχυρή» της βιομηχανίας, η πρωτεϊνάση Κ είναι τόσο χαμηλών τόνων που έχουμε παραβλέψει εδώ και καιρό τη σημασία της.Με το ξέσπασμα της νέας επιδημίας του στέμματος, η ζήτηση για πρωτεϊνάση Κ έχει αυξηθεί στα ύψη και η προσφορά στο εσωτερικό και στο εξωτερικό είναι πολύ πίσω από την κατανάλωση, και όλοι ξαφνικά συνειδητοποίησαν ότι η πρωτεϊνάση Κ είναι τόσο σημαντική.
Ποια είναι η χρήση της πρωτεϊνάσης Κ;
Η πρωτεϊνάση Κ είναι μια πρωτεάση σερίνης με πρωτεολυτική ενζυμική δραστηριότητα και μπορεί να διατηρήσει τη δραστηριότητα σε ένα ευρύ φάσμα περιβαλλόντων (pH (4-12,5), ρυθμιστικό διάλυμα υψηλής περιεκτικότητας σε αλάτι, υψηλή θερμοκρασία 70°C, κ.λπ.).Επιπλέον, η δράση της πρωτεϊνάσης Κ δεν αναστέλλεται από SDS, ουρία, EDTA, υδροχλωρική γουανιδίνη, ισοθειοκυανική γουανιδίνη, κ.λπ., και μια ορισμένη ποσότητα απορρυπαντικού μπορεί επίσης να ενισχύσει τη δραστηριότητα της πρωτεϊνάσης Κ. Στην ιατρική θεραπεία (απολύμανση ιών και μικροβίων ), τρόφιμα (τρυφεροποίηση κρέατος), δέρμα (μαλακτικό τρίχας), οινοποίηση (διαύγαση με αλκοόλ), παρασκευή αμινοξέων (αποικοδομημένα φτερά), εκχύλιση νουκλεϊκού οξέος, υβριδισμός in situ κ.λπ., πρωτεϊνάση Κ Υπάρχουν εφαρμογές.Η πιο συχνά χρησιμοποιούμενη εφαρμογή είναι η εκχύλιση νουκλεϊκού οξέος.
Η πρωτεϊνάση Κ μπορεί να ενζυμολύσει όλα τα είδη πρωτεϊνών στο δείγμα, συμπεριλαμβανομένων εκείνων των ιστονών που είναι στενά συνδεδεμένες με νουκλεϊκά οξέα, έτσι ώστε τα νουκλεϊκά οξέα να μπορούν να απελευθερωθούν από το δείγμα και να απελευθερωθούν στο εκχύλισμα, διευκολύνοντας το επόμενο βήμα εκχύλισης και καθαρισμού.Στην ανίχνευση του ιικού νουκλεϊκού οξέος, η πρωτεϊνάση Κ είναι ένα από τα σημαντικά συστατικά στο διάλυμα δειγματοληψίας ιού.Η πρωτεϊνάση Κ μπορεί να σπάσει και να αδρανοποιήσει την πρωτεΐνη περιβλήματος του ιού, η οποία είναι ασφαλέστερη κατά τη διάρκεια του σταδίου μεταφοράς και ανίχνευσης.Επιπλέον, η πρωτεϊνάση Κ μπορεί επίσης να αποικοδομήσει Η RNase αποτρέπει την αποικοδόμηση του ιικού RNA και διευκολύνει την ανίχνευση νουκλεϊκού οξέος.
Η ολονύκτια φήμη της πρωτεϊνάσης Κ
Είτε στον τομέα της επιστημονικής έρευνας είτε στον τομέα της IVD, η εκχύλιση νουκλεϊκού οξέος είναι το πιο βασικό πείραμα, επομένως η πρωτεϊνάση Κ ήταν πάντα μια πολύ σημαντική ύπαρξη.Ωστόσο, στο παρελθόν, η πρωτεϊνάση Κ ήταν πολύ λιγότερο γνωστή από τον ρόλο της.Ένα μεγάλο μέρος αυτού οφείλεται στο ότι η σχέση προσφοράς και ζήτησης πρωτεϊνάσης Κ ήταν πολύ σταθερή.Λίγοι άνθρωποι θα πίστευαν ότι η παροχή πρωτεϊνάσης Κ θα ήταν πρόβλημα.
Με το ξέσπασμα της νέας επιδημίας του στέμματος, η ζήτηση για δοκιμές νουκλεϊκού οξέος έχει αυξηθεί.Από τα τέλη Ιουνίου 2020, η Κίνα έχει ολοκληρώσει σχεδόν 90 εκατομμύρια νέες δοκιμές κορώνας και αυτός ο αριθμός είναι ακόμη πιο ανησυχητικός σε παγκόσμια κλίμακα.Σε πειράματα εκχύλισης νουκλεϊκού οξέος, η συγκέντρωση εργασίας της πρωτεϊνάσης Κ είναι περίπου 50-200 μg/mL.Γενικά, χρειάζονται περίπου 100 μg πρωτεϊνάσης Κ για να εξαχθεί ένα δείγμα νουκλεϊκού οξέος.Στην πραγματική χρήση, προκειμένου να αυξηθεί η αποτελεσματικότητα της εκχύλισης νουκλεϊκού οξέος, συχνά η Πρωτεϊνάση Κ χρησιμοποιείται σε αυξημένη ποσότητα.Η ανίχνευση νουκλεϊκού οξέος του νέου κοροναϊού έχει φέρει μεγάλη ζήτηση πρωτεϊνάσης Κ.Το αρχικό ισοζύγιο προσφοράς και ζήτησης πρωτεϊνάσης Κ διαλύθηκε γρήγορα και η πρωτεϊνάση Κ έγινε ένα σημαντικό υλικό πρόληψης επιδημιών μέσα σε μια νύχτα.
Δυσκολίες στην παραγωγή πρωτεϊνάσης Κ
Αν και με την ανάπτυξη της επιδημίας, η σημαντική αξία της πρωτεϊνάσης Κ έχει εκτιμηθεί από τους ανθρώπους, είναι ντροπιαστικό το γεγονός ότι λόγω της υπερβολικής χαμηλών τόνων της πρωτεϊνάσης Κ, λίγες εγχώριες εταιρείες έχουν εμπλακεί στην παραγωγή της πρωτεϊνάσης Κ. Όταν οι άνθρωποι θέλουν να δημιουργήσουν παραγωγή πρωτεϊνάσης Κ Κατά τη διαδικασία παραγωγής, ανακαλύφθηκε ότι η πρωτεϊνάση Κ είναι μια εξαιρετικά ειδική πρωτεΐνη.Είναι εξαιρετικά δύσκολο να επεκταθεί η παραγωγική ικανότητα της πρωτεϊνάσης Κ σε σύντομο χρονικό διάστημα.
Η μεγάλης κλίμακας παραγωγή πρωτεϊνάσης Κ αντιμετωπίζει τις ακόλουθες δυσκολίες
1. Χαμηλή έκφραση
Η πρωτεϊνάση Κ μπορεί να αποικοδομήσει μη ειδικά τις περισσότερες πρωτεΐνες και να προκαλέσει σοβαρή τοξικότητα στο κύτταρο ξενιστή έκφρασης.Επομένως, το επίπεδο έκφρασης της πρωτεϊνάσης Κ είναι γενικά πολύ χαμηλό.Ο έλεγχος των συστημάτων έκφρασης και των στελεχών που εκφράζουν σε μεγάλο βαθμό την πρωτεϊνάση Κ απαιτεί γενικά μεγαλύτερο κύκλο.
2. Υπολείμματα χρωστικών και νουκλεϊκών οξέων
Η ζύμωση μεγάλης κλίμακας εισάγει μεγάλη ποσότητα υπολειμμάτων χρωστικής και νουκλεϊκού οξέος ξενιστή.Είναι δύσκολο να αφαιρεθούν αυτές οι ακαθαρσίες με μια απλή διαδικασία καθαρισμού και ο πολύπλοκος καθαρισμός αυξάνει το κόστος και μειώνει το ποσοστό ανάκτησης.
3. Αστάθεια
Η πρωτεϊνάση Κ δεν είναι αρκετά σταθερή, μπορεί να ενζυμολυθεί μόνη της και είναι δύσκολο να αποθηκευτεί σταθερά στους 37°C για μεγάλο χρονικό διάστημα χωρίς προστατευτικό παράγοντα.
4. Εύκολο να καθιζάνει
Κατά την παρασκευή της λυοφιλοποιημένης σκόνης πρωτεϊνάσης Κ, προκειμένου να διασφαλιστεί ότι η περιεκτικότητα σε στερεά πρωτεϊνάση Κ στην λυοφιλοποιημένη σκόνη είναι μεγάλη, είναι απαραίτητο να προστεθεί ένας λυοφιλοποιημένος προστατευτικός παράγοντας σε υψηλή συγκέντρωση, αλλά όταν η Η συγκέντρωση της πρωτεϊνάσης Κ φτάνει τα 20 mg/mL και πάνω, είναι εύκολο. Η συσσώρευση σχηματίζει ένα ίζημα, το οποίο φέρνει μεγάλες δυσκολίες στη λυοφιλίωση της πρωτεϊνάσης Κ με υψηλή περιεκτικότητα σε στερεά.
5. Μεγάλη επένδυση
Η πρωτεϊνάση Κ έχει ισχυρή δράση πρωτεάσης και μπορεί να υδρολύσει άλλες πρωτεάσες στο εργαστήριο.Επομένως, η πρωτεϊνάση Κ απαιτεί εξειδικευμένους χώρους παραγωγής, εξοπλισμό και προσωπικό για έρευνα και ανάπτυξη και παραγωγή.
Διάλυμα πρωτεϊνάσης Κ της XD BIOCHEM
Η XD BIOCHEM διαθέτει μια πλατφόρμα έκφρασης και καθαρισμού ώριμων πρωτεϊνών και έχει πλούσια εμπειρία στην έκφραση και τον καθαρισμό ανασυνδυασμένων πρωτεϊνών και τη βελτιστοποίηση των διαδικασιών παραγωγής.Μέσω της ταχείας συγκρότησης μιας ομάδας έρευνας και ανάπτυξης, η μεγάλης κλίμακας διαδικασία παραγωγής της πρωτεϊνάσης Κ έχει ξεπεραστεί.Η μηνιαία παραγωγή λυοφιλοποιημένης σκόνης είναι μεγαλύτερη από 30 KG.Το προϊόν έχει σταθερή απόδοση, υψηλή ενζυμική ειδική δραστηριότητα και δεν έχει υπολείμματα κυτοχρώματος και νουκλεϊκού οξέος ξενιστή.Καλώς ήρθατε στην επικοινωνία με την XD BIOCHEM Λάβετε ένα δοκιμαστικό πακέτο (E-mail:sales@xdbiochem.comΤηλ: +86 513 81163739).
Οι τεχνικές λύσεις της XD BIOCHEM περιλαμβάνουν
Χρησιμοποιώντας ενσωμάτωση πλασμιδίου πολλαπλών αντιγράφων, επιλέγονται στελέχη υψηλής έκφρασης με επίπεδο έκφρασης 8 g/L, γεγονός που ξεπερνά το πρόβλημα του χαμηλού επιπέδου έκφρασης της πρωτεϊνάσης Κ.
Μέσω της καθιέρωσης μιας διαδικασίας καθαρισμού πολλαπλών σταδίων, τα υπολείμματα κυτοχρώματος ξενιστή και νουκλεϊκού οξέος της πρωτεϊνάσης Κ αφαιρέθηκαν με επιτυχία κάτω από την τυπική τιμή.
Μέσω διαλογής υψηλής απόδοσης σκευασμάτων προστατευτικού ρυθμιστικού διαλύματος, επιλέχθηκε ένα ρυθμιστικό διάλυμα που μπορεί να αποθηκεύει σταθερά την πρωτεϊνάση Κ στους 37°C.
Τα ρυθμιστικά διαλογής ξεπερνούν το πρόβλημα ότι η πρωτεϊνάση Κ είναι εύκολο να συσσωματωθεί και να κατακρημνιστεί σε υψηλές συγκεντρώσεις και θέτει τα θεμέλια για λυοφιλίωση με υψηλή περιεκτικότητα σε στερεά πρωτεϊνάση Κ.
Δείγμα πρωτεϊνάσης Κ XD BIOCHEM
Δοκιμή σταθερότητας XD BIOCHEM πρωτεϊνάσης Κ: δεν θα υπάρξει σημαντική αλλαγή στη δραστηριότητα μετά από 80 ημέρες σε θερμοκρασία δωματίου
Δοκιμή σταθερότητας XD BIOCHEM πρωτεϊνάσης Κ: δεν θα υπάρξει σημαντική αλλαγή στη δραστηριότητα μετά από 80 ημέρες σε θερμοκρασία δωματίου.
Σύγκριση του αποτελέσματος εκχύλισης νουκλεϊκού οξέος της πρωτεϊνάσης Κ XD BIOCHEM και ανταγωνιστικών προϊόντων.Στη διαδικασία εκχύλισης νουκλεϊκού οξέος χρησιμοποιούνται αντίστοιχα XD BIOCHEM και ανταγωνιστική πρωτεϊνάση Κ.Η αποτελεσματικότητα εκχύλισης της πρωτεϊνάσης Κ XD BIOCHEM είναι υψηλότερη και η τιμή Ct του γονιδίου στόχου είναι χαμηλότερη.
Ώρα δημοσίευσης: Δεκ-31-2021