Υπάρχουν πολλοί αφανείς ήρωες γύρω μας, που φαίνονται συνηθισμένοι, αλλά στην πραγματικότητα μας προσφέρουν σιωπηλά πολλά. Η πρωτεϊνάση Κ είναι ο «αφανής ήρωας» στη βιομηχανία μοριακής διαγνωστικής, αν και σε σύγκριση με τους «μεγάλους και ισχυρούς» της βιομηχανίας, η πρωτεϊνάση Κ είναι τόσο χαμηλών τόνων που έχουμε παραβλέψει εδώ και καιρό τη σημασία της. Με το ξέσπασμα της νέας επιδημίας του κορωνοϊού, η ζήτηση για πρωτεϊνάση Κ έχει εκτοξευθεί στα ύψη και η προσφορά στο εσωτερικό και στο εξωτερικό είναι πολύ πίσω από την κατανάλωση, και όλοι ξαφνικά συνειδητοποίησαν ότι η πρωτεϊνάση Κ είναι τόσο σημαντική.
Ποια είναι η χρήση της πρωτεϊνάσης Κ;
Η πρωτεϊνάση Κ είναι μια σερινοπρωτεάση με πρωτεολυτική ενζυμική δράση και μπορεί να διατηρήσει τη δράση της σε ένα ευρύ φάσμα περιβαλλόντων (pH (4-12,5), ρυθμιστικό διάλυμα υψηλής περιεκτικότητας σε άλατα, υψηλή θερμοκρασία 70°C, κ.λπ.). Επιπλέον, η δράση της πρωτεϊνάσης Κ δεν αναστέλλεται από SDS, ουρία, EDTA, υδροχλωρική γουανιδίνη, ισοθειοκυανική γουανιδίνη, κ.λπ., και μια ορισμένη ποσότητα απορρυπαντικού μπορεί επίσης να ενισχύσει τη δράση της πρωτεϊνάσης Κ. Στην ιατρική περίθαλψη (απολύμανση από ιούς και μικροβιακές ασθένειες), στα τρόφιμα (μαλάκωμα κρέατος), στο δέρμα (μαλάκωμα μαλλιών), στην οινοποίηση (διαύγαση αλκοόλης), στην παρασκευή αμινοξέων (αποικοδομημένα φτερά), στην εκχύλιση νουκλεϊκών οξέων, στην υβριδοποίηση in situ, κ.λπ., η πρωτεϊνάση Κ έχει εφαρμογές. Η πιο συχνά χρησιμοποιούμενη εφαρμογή είναι η εκχύλιση νουκλεϊκών οξέων.
Η πρωτεϊνάση Κ μπορεί να ενζυμολύσει όλα τα είδη πρωτεϊνών στο δείγμα, συμπεριλαμβανομένων εκείνων των ιστονών που είναι στενά συνδεδεμένες με νουκλεϊκά οξέα, έτσι ώστε τα νουκλεϊκά οξέα να μπορούν να απελευθερωθούν από το δείγμα και να εισέλθουν στο εκχύλισμα, διευκολύνοντας το επόμενο βήμα της εκχύλισης και του καθαρισμού. Στην ανίχνευση ιικού νουκλεϊκού οξέος, η πρωτεϊνάση Κ είναι ένα από τα σημαντικά συστατικά του διαλύματος δειγματοληψίας ιού. Η πρωτεϊνάση Κ μπορεί να διασπάσει και να απενεργοποιήσει την πρωτεΐνη περιβλήματος του ιού, κάτι που είναι ασφαλέστερο κατά το στάδιο της μεταφοράς και της ανίχνευσης. Επιπλέον, η πρωτεϊνάση Κ μπορεί επίσης να αποικοδομήσει την RNάση, η οποία αποτρέπει την αποικοδόμηση του ιικού RNA και διευκολύνει την ανίχνευση νουκλεϊκών οξέων.
Η φήμη της πρωτεϊνάσης Κ από τη μια μέρα στην άλλη
Είτε στον τομέα της επιστημονικής έρευνας είτε στον τομέα της ενδοσκοπικής διασωλήνωσης (IVD), η εξαγωγή νουκλεϊκών οξέων είναι το πιο βασικό πείραμα, επομένως η πρωτεϊνάση Κ ήταν πάντα μια πολύ σημαντική ύπαρξη. Ωστόσο, στο παρελθόν, η πρωτεϊνάση Κ ήταν πολύ λιγότερο γνωστή από τον ρόλο της. Ένα μεγάλο μέρος αυτού οφειλόταν στο ότι η σχέση προσφοράς και ζήτησης της πρωτεϊνάσης Κ ήταν πολύ σταθερή. Λίγοι άνθρωποι θα πίστευαν ότι η προσφορά πρωτεϊνάσης Κ θα αποτελούσε πρόβλημα.
Με το ξέσπασμα της νέας επιδημίας κορώνας, η ζήτηση για δοκιμές νουκλεϊκού οξέος έχει αυξηθεί κατακόρυφα. Μέχρι τα τέλη Ιουνίου 2020, η Κίνα είχε ολοκληρώσει σχεδόν 90 εκατομμύρια νέες δοκιμές κορώνας και αυτός ο αριθμός είναι ακόμη πιο ανησυχητικός σε παγκόσμια κλίμακα. Σε πειράματα εκχύλισης νουκλεϊκού οξέος, η λειτουργική συγκέντρωση της πρωτεϊνάσης Κ είναι περίπου 50-200 μg/mL. Γενικά, χρειάζονται περίπου 100 μg πρωτεϊνάσης Κ για την εκχύλιση ενός δείγματος νουκλεϊκού οξέος. Στην πραγματική χρήση, προκειμένου να αυξηθεί η αποτελεσματικότητα της εκχύλισης νουκλεϊκού οξέος, η πρωτεϊνάση Κ συχνά χρησιμοποιείται σε αυξημένη ποσότητα. Η ανίχνευση νουκλεϊκού οξέος του νέου κορωνοϊού έχει φέρει μεγάλη ζήτηση για πρωτεϊνάση Κ. Η αρχική ισορροπία προσφοράς και ζήτησης πρωτεϊνάσης Κ διακόπηκε γρήγορα και η πρωτεϊνάση Κ έγινε ένα σημαντικό υλικό πρόληψης επιδημιών από τη μια μέρα στην άλλη.
Δυσκολίες στην παραγωγή πρωτεϊνάσης Κ
Παρόλο που με την ανάπτυξη της επιδημίας, η σημαντική αξία της πρωτεϊνάσης Κ έχει εκτιμηθεί από τους ανθρώπους, είναι ενοχλητικό το γεγονός ότι λόγω της υπερβολικά χαμηλής τιμής της πρωτεϊνάσης Κ, λίγες εγχώριες εταιρείες έχουν εμπλακεί στην παραγωγή της πρωτεϊνάσης Κ. Όταν οι άνθρωποι θέλουν να δημιουργήσουν παραγωγή πρωτεϊνάσης Κ κατά τη διάρκεια της παραγωγικής διαδικασίας, ανακαλύφθηκε ότι η πρωτεϊνάση Κ είναι μια εξαιρετικά ειδική πρωτεΐνη. Είναι εξαιρετικά δύσκολο να επεκταθεί η παραγωγική ικανότητα της πρωτεϊνάσης Κ σε σύντομο χρονικό διάστημα.
Η παραγωγή πρωτεϊνάσης Κ σε μεγάλη κλίμακα αντιμετωπίζει τις ακόλουθες δυσκολίες:
1. Χαμηλή έκφραση
Η πρωτεϊνάση Κ μπορεί να αποικοδομήσει μη ειδικά τις περισσότερες πρωτεΐνες και να προκαλέσει σοβαρή τοξικότητα στο κύτταρο ξενιστή έκφρασης. Επομένως, το επίπεδο έκφρασης της πρωτεϊνάσης Κ είναι γενικά πολύ χαμηλό. Ο έλεγχος συστημάτων έκφρασης και στελεχών που εκφράζουν σε υψηλό βαθμό την πρωτεϊνάση Κ απαιτεί γενικά μεγαλύτερο κύκλο.
2. Υπολείμματα χρωστικών και νουκλεϊκών οξέων
Η ζύμωση μεγάλης κλίμακας εισάγει μεγάλη ποσότητα χρωστικής και υπολειμμάτων νουκλεϊκών οξέων του ξενιστή. Είναι δύσκολο να απομακρυνθούν αυτές οι ακαθαρσίες με μια απλή διαδικασία καθαρισμού, και ο πολύπλοκος καθαρισμός αυξάνει το κόστος και μειώνει το ποσοστό ανάκτησης.
3. Αστάθεια
Η πρωτεϊνάση Κ δεν είναι αρκετά σταθερή, μπορεί να αυτοενζυμωθεί και είναι δύσκολο να αποθηκευτεί σταθερά στους 37°C για μεγάλο χρονικό διάστημα χωρίς προστατευτικό παράγοντα.
4. Εύκολο στην καθίζηση
Κατά την παρασκευή της λυοφιλιωμένης σκόνης πρωτεϊνάσης Κ, προκειμένου να διασφαλιστεί ότι η περιεκτικότητα σε στερεά της πρωτεϊνάσης Κ στην λυοφιλιωμένη σκόνη είναι μεγάλη, είναι απαραίτητο να προστεθεί ένας λυοφιλιωμένος προστατευτικός παράγοντας σε υψηλή συγκέντρωση, αλλά όταν η συγκέντρωση της πρωτεϊνάσης Κ φτάσει τα 20mg/mL και άνω, είναι εύκολο η συσσωμάτωση να σχηματίσει ένα ίζημα, το οποίο δημιουργεί μεγάλες δυσκολίες στην λυοφιλίωση της πρωτεϊνάσης Κ με υψηλή περιεκτικότητα σε στερεά.
5. Μεγάλη επένδυση
Η πρωτεϊνάση Κ έχει ισχυρή πρωτεασική δράση και μπορεί να υδρολύσει άλλες πρωτεάσες στο εργαστήριο. Επομένως, η πρωτεϊνάση Κ απαιτεί εξειδικευμένους χώρους παραγωγής, εξοπλισμό και προσωπικό για έρευνα, ανάπτυξη και παραγωγή.
Διάλυμα πρωτεϊνάσης Κ της XD BIOCHEM
Η XD BIOCHEM διαθέτει μια πλατφόρμα έκφρασης και καθαρισμού ώριμων πρωτεϊνών και πλούσια εμπειρία στην έκφραση και τον καθαρισμό ανασυνδυασμένων πρωτεϊνών και στη βελτιστοποίηση των διαδικασιών παραγωγής. Μέσω της ταχείας δημιουργίας μιας ομάδας έρευνας και ανάπτυξης, έχει ξεπεραστεί η διαδικασία παραγωγής μεγάλης κλίμακας της πρωτεϊνάσης Κ. Η μηνιαία παραγωγή λυοφιλιωμένης σκόνης είναι μεγαλύτερη από 30 KG. Το προϊόν έχει σταθερή απόδοση, υψηλή ενζυμική ειδική δραστικότητα και δεν έχει υπολείμματα κυτοχρώματος και νουκλεϊκών οξέων ξενιστή. Καλώς ήρθατε να επικοινωνήσετε με την XD BIOCHEM. Λάβετε ένα δοκιμαστικό πακέτο (Email:sales@xdbiochem.comΤηλ.: +86 513 81163739).
Οι τεχνικές λύσεις της XD BIOCHEM περιλαμβάνουν
Χρησιμοποιώντας ενσωμάτωση πολλαπλών αντιγράφων πλασμιδίων, επιλέγονται στελέχη υψηλής έκφρασης με επίπεδο έκφρασης 8g/L, γεγονός που ξεπερνά το πρόβλημα του χαμηλού επιπέδου έκφρασης της πρωτεϊνάσης Κ.
Μέσω της καθιέρωσης μιας διαδικασίας καθαρισμού πολλαπλών σταδίων, το κυτόχρωμα του ξενιστή και τα υπολείμματα νουκλεϊκού οξέος της πρωτεϊνάσης Κ απομακρύνθηκαν με επιτυχία κάτω από την τυπική τιμή.
Μέσω υψηλής απόδοσης διαλογής προστατευτικών σκευασμάτων ρυθμιστικού διαλύματος, επιλέχθηκε ένα ρυθμιστικό διάλυμα που μπορεί να αποθηκεύσει σταθερά την πρωτεϊνάση Κ στους 37°C.
Τα ρυθμιστικά διαλύματα διαλογής ξεπερνούν το πρόβλημα ότι η πρωτεϊνάση Κ συσσωματώνεται και καθιζάνει εύκολα σε υψηλές συγκεντρώσεις και θέτουν τα θεμέλια για την λυοφιλοποίηση με υψηλή περιεκτικότητα σε στερεά της πρωτεϊνάσης Κ.
Δείγμα πρωτεϊνάσης Κ XD BIOCHEM
Δοκιμή σταθερότητας πρωτεϊνάσης Κ XD BIOCHEM: δεν θα υπάρξει σημαντική αλλαγή στη δραστικότητα μετά από 80 ημέρες σε θερμοκρασία δωματίου
Δοκιμή σταθερότητας πρωτεϊνάσης Κ XD BIOCHEM: δεν θα υπάρξει σημαντική αλλαγή στη δραστικότητα μετά από 80 ημέρες σε θερμοκρασία δωματίου.
Σύγκριση της επίδρασης εκχύλισης νουκλεϊκού οξέος της πρωτεϊνάσης Κ XD BIOCHEM και ανταγωνιστικών προϊόντων. Στη διαδικασία εκχύλισης νουκλεϊκού οξέος, χρησιμοποιούνται αντίστοιχα η XD BIOCHEM και η ανταγωνιστική πρωτεϊνάση Κ. Η αποτελεσματικότητα εκχύλισης της πρωτεϊνάσης Κ XD BIOCHEM είναι υψηλότερη και η τιμή Ct του γονιδίου-στόχου είναι χαμηλότερη.
Ώρα δημοσίευσης: 31 Δεκεμβρίου 2021